Ann a bhith a’ dèanamh sgrùdaidhean ginteil, bidh sinn gu tric a’ tighinn tarsainn air sampallan RNA gu leòr, mar eisimpleir, airson a bhith a’ sgrùdadh tumhan beòil beaga bìodach, eadhon sampallan aon-chealla, agus sampallan de mhùthaidhean gine sònraichte a tha air an tar-sgrìobhadh aig ìrean glè ìosal ann an ceallan daonna.Gu dearbh, airson an deuchainn COVID-19, mura h-eil na swaban san àite cheart no mura h-eil amannan gu leòr aig àm samplachaidh, bidh meud an t-sampall gu math ìosal, agus is e sin as coireach gun tàinig Coimisean na Slàinte is Dealbhadh Teaghlaich a-mach o chionn dà latha agus seachad air an deuchainn, agus mura do ghabh an samplaiche searbhag niuclasach sia sampaill, faodaidh tu aithris a dhèanamh air.
Tha cugallachd an reagent cudromach oir tha an duilgheadas seo no an duilgheadas sin againn, mar sin dè as urrainn dhuinn a dhèanamh gus cugallachd RT-PCR a leasachadh?
Mus bruidhinn sinn mu fhuasglaidhean a dh’ fhaodadh a bhith ann, bheir sinn iomradh air dà dhuilgheadas mòr leis an t-suidheachadh air an tug sinn iomradh.
An toiseach, tha dragh oirnn mu chall RNA nuair nach eil againn ach beagan àireamhan cealla san sampall againn.Ma thèid dòighean dealachaidh is glanaidh traidiseanta a chleachdadh, leithid modh colbh no dòigh sileadh searbhag niuclasach, tha teansa mòr ann gun tèid am beagan shampaill a chall.Is e aon fhuasgladh moileciuil giùlain a chuir ris, leithid tRNA, ach eadhon an uairsin, chan eil gealltanas sam bith ann gu bheil an deuchainn ath-bheothachaidh againn ceart gu leòr.
Mar sin dè an dòigh as fheàrr?Is e deagh roghainn airson ceallan cultarach no sampallan microanatomical lysis dìreach a chleachdadh.
Is e am beachd na ceallan a roinn airson 5 mionaidean, an RNA a leigeil a-steach don fhuasgladh, an uairsin stad a chuir air an ath-bhualadh airson 2 mhionaid, an uairsin cuir an lysate gu dìreach ris an ath-sgrìobhadh tar-sgrìobhaidh cùil gus nach tèid RNA a chall, agus mu dheireadh cuir an cDNA a thig às gu dìreach. a-steach don fhreagairt fìor-ùine.
Ach dè ma tha, air sgàth àite tòiseachaidh cuibhrichte no beagan faireachdainn gine targaid, gun urrainn dhuinn an RNA gu lèir ath-chuairteachadh agus fhathast gun a bhith a’ toirt seachad teamplaidean gu leòr gus deagh chomharran fìor-ùine fhaighinn?
Anns a 'chùis seo, faodaidh an ceum ro-mheudachadh a bhith glè fheumail.
Tha na leanas na sgeama gus cugallachd àrdachadh às deidh tar-sgrìobhadh cùil.Mus tòisich sinn, feumaidh sinn faighneachd sìos an abhainn dè na targaidean anns a bheil ùidh againn, gus primers sònraichte a dhealbhadh airson na targaidean sin airson ro-leudachadh.
Faodar seo a choileanadh le bhith a 'cruthachadh measgachadh de primer le suas ri 100 paidhir de primers agus reaction cearcall de 10 gu 14 tursan.Mar sin, tha feum air Master Mix a chaidh a dhealbhadh gu sònraichte airson an riatanas seo gus an cDNA a gheibhear ro-leudachadh.
Is e an adhbhar airson an àireamh de chuairtean a shuidheachadh eadar 10 agus 14 gu bheil an àireamh chuingealaichte seo de chuairtean a’ dèanamh cinnteach gu bheil na diofar thargaidean air thuaiream, rud a tha deatamach do luchd-rannsachaidh aig a bheil feum air fiosrachadh cainneachdail moileciuil.
Às deidh ro-leudachadh, gheibh sinn tòrr cDNA, gus am bi an cugallachd lorgaidh aig a’ cheann-cùil air a leasachadh gu mòr, agus is urrainn dhuinn eadhon an sampall a lagachadh agus ioma ath-bheachdan PCR fìor-ùine a dhèanamh gus cuir às do mhearachdan air thuaiream a dh’ fhaodadh a bhith ann.
Ùine puist: Giblean-11-2023